酶聯免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法，與儀器分析技術相比具有快速、簡便、準確和靈敏度高等特點，但對實驗操作條件的要求比較嚴格。實驗條件主要由實驗室的操作環境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但ELISA試劑盒對實驗室操作環境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的，人為的誤差相對嚴重一些。本人結合幾年的工作實踐介紹一下進行ELISA操作的時候應該注意的問題。
酶聯免疫試劑盒操作的通用的規則
1 .要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質，溫度環境為20％左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0．2g)每一把微量加樣器都應該將其高量程和zui低量程進行確定。
2. 在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。
3. 吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。
4. 將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸，液滴會自然流下去。吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
5. 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
6 .液體全部加入酶標孔后，將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應。
7. 孵育時要使蓋板膜封好酶標板，防止水分蒸發，以防曲線不成線性。
8 .實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標板只要取出所需量。
9. 由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
10 .手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
11 .檢測吸光度前應將酶標儀打開，將其預熱30min以上。
12. 底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚
13 .孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。
14 .要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。
15. 對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
16 .沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
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